SHuffleT7E.coli：100μl/支
pUC19(controlvector，10pg/μl):10μl
保存條件(保質期)：-80℃（6個月）
基因型
F′lac,pro,lacIq/Δ(ara-leu)7697araD13fhuA2lacZ::T7gene1Δ(phoA)PvullphoRahpC*galE(orU)galKλatt::pNEB3-r1-cDsbC(SpecR,laclq)ΔtrxBrpsL150(StrR)ΔgorΔ(malF)3
產品說明
SHuffleT7E.coli菌株是K12的衍生菌株。該菌株的染色體中整合了一個拷貝的二硫鍵異構酶DsbC基因，可以促進含有二硫鍵蛋白的正確折疊；此外DsbC還是一個分子伴侶，可以幫助不含二硫鍵蛋白正確折疊，形成正確構象，同時該菌株可降低目的基因的本底表達，適合于毒性基因的原核表達。SHuffleT7E.coli菌株染色體中整合了一個拷貝的T7RNA聚合酶基因，可以表達噬菌體T7RNA聚合酶，適合于T7啟動子誘導的蛋白表達；該菌株還可以表達大腸桿菌RNA聚合酶，所以可用于pET系列，pGEX，pMAL等質粒的蛋白表達。SHuffleT7E.coli菌株具有抗T1噬菌體感染的特點，具有鏈霉素，壯觀霉素抗性。SHuffleT7E.coli感受態細胞由特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率達108cfu/μgDNA。
操作方法
1.SHuffleT7E.coli感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的質粒并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。
3.向離心管中加入700μl不含抗生素的LB無菌培養液，37℃，200rpm復蘇60分鐘。
4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取50μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的LB培養基上。
5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。
IPTG配制：
Preparea1MsolutionofIPTG(Isopropyl-β-D-thiogalactoside;Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside)
bydissolving2.38gofIPTGinddwaterandadjustthefinalvolumeto10ml.Filtersterilizebeforeuse.
注意事項
1.感受態細胞最好在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。
2.轉化高濃度的質粒可相應減少最終用于涂板的菌量。
3.誘導時，IPTG濃度可選（0.1-10mM均可）。
4.為獲得需要量的蛋白，最佳誘導時間，溫度，IPTG濃度需實驗者優化。
5.SHuffleT7E.coli菌株具有鏈霉素，壯觀霉素抗性，不可用于具有鏈霉素，壯觀霉素抗性質粒的轉化。
pUC19(controlvector，10pg/μl):10μl
保存條件(保質期)：-80℃（6個月）
基因型
F′lac,pro,lacIq/Δ(ara-leu)7697araD13fhuA2lacZ::T7gene1Δ(phoA)PvullphoRahpC*galE(orU)galKλatt::pNEB3-r1-cDsbC(SpecR,laclq)ΔtrxBrpsL150(StrR)ΔgorΔ(malF)3
產品說明
SHuffleT7E.coli菌株是K12的衍生菌株。該菌株的染色體中整合了一個拷貝的二硫鍵異構酶DsbC基因，可以促進含有二硫鍵蛋白的正確折疊；此外DsbC還是一個分子伴侶，可以幫助不含二硫鍵蛋白正確折疊，形成正確構象，同時該菌株可降低目的基因的本底表達，適合于毒性基因的原核表達。SHuffleT7E.coli菌株染色體中整合了一個拷貝的T7RNA聚合酶基因，可以表達噬菌體T7RNA聚合酶，適合于T7啟動子誘導的蛋白表達；該菌株還可以表達大腸桿菌RNA聚合酶，所以可用于pET系列，pGEX，pMAL等質粒的蛋白表達。SHuffleT7E.coli菌株具有抗T1噬菌體感染的特點，具有鏈霉素，壯觀霉素抗性。SHuffleT7E.coli感受態細胞由特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率達108cfu/μgDNA。
操作方法
1.SHuffleT7E.coli感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的質粒并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。
3.向離心管中加入700μl不含抗生素的LB無菌培養液，37℃，200rpm復蘇60分鐘。
4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取50μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的LB培養基上。
5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。
IPTG配制：
Preparea1MsolutionofIPTG(Isopropyl-β-D-thiogalactoside;Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside)
bydissolving2.38gofIPTGinddwaterandadjustthefinalvolumeto10ml.Filtersterilizebeforeuse.
注意事項
1.感受態細胞最好在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。
2.轉化高濃度的質粒可相應減少最終用于涂板的菌量。
3.誘導時，IPTG濃度可選（0.1-10mM均可）。
4.為獲得需要量的蛋白，最佳誘導時間，溫度，IPTG濃度需實驗者優化。
5.SHuffleT7E.coli菌株具有鏈霉素，壯觀霉素抗性，不可用于具有鏈霉素，壯觀霉素抗性質粒的轉化。
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搜索MSDS
SHuffle T7 E. coli感受態細胞
